Elisa实验：如果对照孔正常但样本异常，怎么判断

　　Elisa实验：如果对照孔正常但样本异常，怎么判断

　　对照孔正常说明整个实验体系(试剂盒、孵育、洗板、仪器)有效，样本异常可以通过「分层排查法」快速定位根源，全程无需更换试剂盒：

　　第一步：先区分是单样本异常还是多样本异常

　　仅1-2个样本异常‌：90%概率是样本本身的问题，优先排查样本性状。

　　超过30%样本异常‌：大概率是针对这批样本的共性操作细节失误，而非样本个体问题。

　　第二步：单样本异常的精准判断

　　对照孔正常时，单样本异常几乎都来自样本自身的干扰或处理不当：

　　样本OD值异常偏高(远超标准曲线最高点)‌

　　先看外观：存在严重溶血、重度脂血、黄疸，血红蛋白、脂质会引发非特异性显色，直接导致假阳性。

　　梯度稀释验证：把样本按2倍、5倍、10倍梯度稀释后复测，若OD值没有随稀释倍数等比例下降，反而居高不下，说明是异嗜性抗体、类风湿因子等内源性干扰物导致的非特异结合，不是真实高浓度。

　　样本OD值异常偏低(接近空白孔)‌

　　核查样本冻融史：反复冻融超过3次、4℃放置超过72小时，目标抗原/抗体已经降解失活。

　　确认抗凝剂匹配：用了试剂盒不兼容的枸橼酸钠等螯合剂，会直接结合目标物，导致检测值假性偏低。

　　样本复孔CV值>20%‌

　　样本中残留纤维蛋白凝块、细胞碎片，加样时没有充分混匀，导致孔间取样不均，属于典型的样本前处理不到位。

　　第三步：多样本异常的操作细节排查

　　对照孔正常但批量样本异常，说明操作体系对样本的处理环节出了偏差：

　　批量样本OD值整体偏高‌：加样时枪头未一孔一换，出现孔间交叉污染;或样本孵育时温度超时，非特异性结合增强。

　　批量样本OD值整体偏低‌：样本稀释时误用了纯水，而非试剂盒配套的样本稀释液，基质不匹配抑制了抗原抗体结合;或样本加样后孵育时间比说明书要求缩短了1/3以上。

　　批量样本结果无规律跳点‌：加样时移液器量程选错，样本加样量普遍不准，而标准品和对照品是用校准后的精准量程加样，因此对照孔正常。

　　最终验证方法

　　把异常样本用试剂盒配套的样本稀释液做1:10稀释，同时加入异嗜性抗体阻断剂预处理后复测：

　　结果恢复正常：100%是样本基质干扰导致的异常。

　　结果仍异常：用同一份样本换另一款已验证合格的同指标试剂盒复测，若结果正常，说明原试剂盒对该类样本的基质耐受度不足;若结果仍异常，确认是样本中目标物本身的真实浓度异常。

　　注：以上科研产品资料供参考，具体请咨询!

　　天津365上市公司官网一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。365上市公司官网!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。