ELISA实验指南：内源性干扰因素的识别与处理方案

    ELISA实验指南：内源性干扰因素的识别与处理方案

    ELISA实验中，内源性干扰因素主要来源于样本自身成分的异常，这些因素可能导致假阳性或假阴性结果，影响检测的准确性。以下是常见的内源性干扰因素及其识别与处理方案。

    常见内源性干扰因素

    类风湿因子（RF）‌

    干扰机制‌：RF（主要为IgM型）可与固相抗体及酶标二抗的Fc段结合，导致假阳性‌。

    识别方法‌：复测法、不同检测系统比对、稀释法或阻断试验‌。

    处理方案‌：

    使用F(ab)₂片段抗体替代完整IgG‌。

    样本用热变性IgG吸附剂处理。

    加入专用免疫阻断剂（如动物Ig）封闭RF‌。

    补体干扰‌

    干扰机制‌：补体C1q可桥连固相抗体与酶标二抗，引起假阳性‌。

    处理方案‌：

    用EDTA稀释样本或56℃加热灭活C1q‌。

    嗜异性抗体‌

    干扰机制‌：天然抗体与动物Ig结合，导致假阳性/阴性‌。

    处理方案‌：

    在稀释液中加入过量动物Ig（如山羊、小鼠Ig）阻断‌。

    使用靶特异的非Ig亲和蛋白（如Affibody）替代抗体‌。

    自身抗体‌

    干扰机制‌：如抗甲状腺球蛋白抗体，与靶抗原形成复合物干扰检测‌。

    处理方案‌：

    通过理化方法（如酸处理）解离复合物后再检测‌。

    人抗动物抗体‌

    干扰机制‌：接受鼠源性单抗治疗者产生的抗体导致假阳性‌。

    处理方案‌：

    在标本中加入正常鼠Ig(s)阻断‌。

    干扰识别通用策略

    复测与比对‌：使用不同方法或检测系统复测，结果不一致时提示干扰‌。

    稀释试验‌：样本梯度稀释后，若待测物浓度变化不成比例，可能存在干扰。

    阻断试验‌：用阻断剂（如动物Ig）处理样本，比较阻断前后结果差异‌。

    实验优化建议

    样本处理‌：避免溶血、细菌污染，规范抗凝剂使用（如肝素可能增加OD值）‌。

    操作规范‌：确保加样准确、洗板充分，减少操作引入的误差‌。

    通过针对性识别和处理内源性干扰因素，可显著提升ELISA实验的可靠性和准确性。若需进一步了解具体操作细节，可参考上述资源或相关共识指南‌。

    注：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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